Dalam rangka mengembangkan Politeknik Kesehatan Depkes Semarang dan berpartisipasi dalam pembangunan dibidang pelayanan kesehatan, maka perlu menambah jurusan baru, yang diawali pelaksanaan studi kelayakan Diploma III Analis Kesehatan dengan menganalisis kebutuhan meliputi ketersediaan sarana, prasarana dan Sumber Daya Manusia (SDM). selanjutnya mengadakan studi banding ke Jurusan Analis Kesehatan yang ada lebih dulu di Semarang, Jawa Tengah.

Tahun 2009 di lokasi Kampus 3 Pedurungan dengan luas tanah 24.629 m² didirikan Jurusan Analis Kesehatan dan bergabung satu lokasi dengan Jurusan Gizi, berdasarkan Surat Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia nomor HK.03.05//I/II/4/1715.1/2009 tanggal 1 April 2009 sebagai salah satu jurusan di Politeknik Kesehatan Depkes Semarang dengan nama Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Depkes Semarang.